二代 KAPA2G Robust DNA 聚合酶研发用于解决多种扩增子类型（富含GC和AT的扩增子）扩增不一致的问题。KAPA2G Robust PCR试剂盒表现更高的持续合成能力和特异性，从而可实现稳定的PCR性能、高灵敏度和改善的常见抑制剂耐受性。KAPA2G Robust DNA 聚合酶的高性能非常适合挑战性 PCR 应用和样本，避免了使用多种酶和方案进行优化。
该酶配有三种反应缓冲液，以及一种高GC含量PCR专用增强剂。KAPA2G缓冲液A针对KAPA2G改良酶特性专门配制。KAPA2G缓冲液B推荐用于被PCR抑制剂污染的模板样品。KAPA2G缓冲液GC推荐用于高GC含量PCR。KAPA增强剂1是专有的DNA去稳定剂，可与KAPA2G缓冲液A或B共同用于高GC含量检测，或复杂二级结构检测。
应用
KAPA2G 稳健 PCR 试剂盒已用于：
富含 GC 或 AT 模板的扩增和基因扩增[1][2]
含有常见 PCR 抑制剂（例如，盐、尿素、SDS 或乙醇）的模板
粗制样本 PCR，例如口腔拭子，培养的哺乳动物、酵母或细菌细胞
菌落 PCR
常规PCR[3]
PCR扩增[4]
禽痘病毒特异性PCR[5]
单重PCR[6]
半定量PCR[7]
生化/生理作用
KAPA2G Robust聚合酶的保真度近似于野生型Taq聚合酶，错配率为每1.7 x 105核苷酸约有1个错误。KAPA2G Robust DNA聚合酶产生的DNA片段与野生型Taq DNA聚合酶产生的DNA片段的性质相同，可用于限制性内切酶消化、克隆和测序应用。同野生型Taq聚合酶一样，KAPA2G Robust聚合酶具有5′→3′聚合酶和5′→3′外切酶活性，但不具有3′→5′外切酶（校正）活性。
特点和优势
高效扩增富含 GC 和 AT 的靶标
在广泛的 GC 和 AT 富集模板中表现稳健
提高 PCR 成功率

提高对普通 PCR 抑制剂的耐受性
从粗样品中高效扩增
单位酶的产量和灵敏度更高

菌落 PCR 中无与伦比的性能
大肠杆菌和酵母细胞直接 PCR 的高产率和一致性

快速注释：
KAPA2G Robust PCR 试剂盒包含 KAPA2G Robust DNA 聚合酶，设计用于高处理能力和抑制剂耐受性。
纯化的基因组 DNA 和粗样品（例如菌落 PCR）均可用作模板。
每 25 μL 反应使用 0.5 UKAPA2G 耐用 DNA 聚合酶。更具挑战性的 PCR（GCrich，粗品）可能需要更高的酶浓度。
每个循环使用 15 s/kb 的延伸时间，对于困难的扩增子或模板则增加到 30-60 s/kb。
1X 时，KAPA2G 缓冲液含 1.5 mM MgCl2。
可使用试剂盒中提供的 25 mM MgCl 2溶液添加额外的 MgCl 2。
KAPA2G 缓冲液 A 针对高产量、高特异性和高灵敏度进行了优化。
推荐将 KAPA2G 缓冲液 B 用于抑制剂污染的模板样品。
KAPA2G GC 缓冲液推荐用于富含 GC 的 PCR (> 70%GC)。
KAPA 增强剂 1 可与 KAPA2G 缓冲液 A 或 B 一起使用，尤其是用于富含 GC 的检测。
反应产物为 3′-dA-尾，可克隆至 TA 克隆载体。
质量
每批 KAPA2G 耐用 DNA 聚合酶经确认含 < 2% 污染蛋白 (Agilent protein 230 Assay)。 KAPA2G 耐用 PCR 试剂盒经过严格的质量控制测试，没有污染外源和内切酶活性，符合 DNA 污染水平的严格要求。
制备说明
使用前务必确保产品已完全解冻并混合。试剂可在 4℃ 条件下保存，供短期使用（最长 1 个月）。放回 -20℃ 条件下长期保存。如果所有组件均已小心处理且未被污染，则如果在室温下（无意中）短时间（长达 3 天）放置，试剂盒预期不会受损。不建议在室温和 4℃ 条件下长期保存。请注意，在-20°C 以上温度下储存的试剂在使用过程中受到污染时更容易发生降解，因此在这种温度下储存由用户自行承担风险。
其他说明
仅用于研究目的。不用于诊断程序。

KAPA2G Robust PCR 试剂盒/KK5023/KK5024