KAPA Long Range PCR 系统是 Taq DNA 聚合酶和具有校对能力的工程古细菌(B 族)DNA 聚合酶的混合物。这种双酶系统专门设计用于支持远程和/或敏感的 PCR,并且比 Taq 聚合酶具有 3-4 倍的高保真度。在热启动配方中,KAPA Long Range 与专有抗体结合,在第一个变性步骤之前使酶失活,消除假扩增产物,提高反应效率和灵敏度。
KAPA Long Range 也以 2X ReadyMix 格式提供,带有上样染料,包含 PCR 所需的所有组分(引物和模板除外)。反应缓冲液中的上样染料可让您直接将 PCR 产物上样到琼脂糖凝胶上,无需额外的步骤。
应用
KAPA 长片段(Long Range)试剂用于:
长靶标和/或低量扩增
标准中短程 PCR
T-A 克隆
用于新一代 DNA 测序的靶向样本富集
聚合酶链式反应 (PCR)[1][2]
生化/生理作用
KAPA Taq 热启动(HotStart)® DNA聚合酶和改良古细菌(B型)DNA聚合酶均具有5’→3’聚合酶活性,但只有KAPA Taq 热启动(HotStart) DNA聚合酶具有5’→3’核酸外切酶活性,只有 B 型 DNA 聚合酶具有3′→5′核酸外切酶(校对)活性。 KAPA 长片段热启动(LongRange HotStart)的保真度比Taq DNA 聚合酶的保真度高2-4倍,但低于纯校对聚合酶(如KAPA HiFi)的保真度。用KAPA 长片段热启动(LongRange HotStart)生成的反应产物带聚A尾,可克隆至 TA 克隆载体。
特点和优势
高灵敏度扩增长靶标:
扩增灵敏度高,特异性可达 15kb 的靶点
低输入 DNA 的高产率
优于复杂目标:
在竞争远程系统失效时表现出高产量、更高的灵敏度和特异性
临时速记:
KAPA LongRange HotStart 是 KAPA Taq HotStart 和校正 DNA 聚合酶的混合物。
适用于短、中、长距离 PCR,以及模板 DNA 量较低的 PCR。
保真度比 Taq 好 2-4 倍。对于短扩增子,替换 Taq DNA 聚合酶以提高产量和/或保真度。
以高产率和高灵敏度放大中长距离目标。
KAPA LongRange Buffer (无 Mg)设计用于长距离、灵敏的 PCR。MgCl 2 单独提供用于优化。
质量
经确认,每批 KAPA LongRange HotStart DNA 聚合酶的污染蛋白含量 < 2% (Agilent protein 230 Assay)。KAPA LongRange HotStart PCR 系统经过严格的质量控制检测,不存在污染的外切和内切酶活性,并且符合 DNA 污染水平方面的严格要求。
制备说明
使用前务必确保产品已完全解冻并混合。试剂可在 4°C 保存,供短期使用(最长 1 个月)。长期储存需恢复至 -20°C。
其他说明
仅供研究使用。不不用于诊断操作。