Mpbio FastDNA SPIN Kit for Soil 土壤DNA快速提取试剂盒

Mpbio FastDNA SPIN Kit for Soil 土壤DNA快速提取试剂盒

FastDNA 试剂盒可从广阔的各种来源中快速有效地分离出 genomic DNA,配套 FastPrep 仪器使用。动植物组织、细菌、海藻、真菌和其他许多标本,在 40 秒内容易被裂解。这个 benchtop 设备是一种专利性的垂直角度运动,这种运动使得裂解微粒能同时从多方向、同步地碰撞。
FastPrep 仪器提供一种极其快速、有效、高度可重复匀质化,超过了用酶消化、超声破碎仪、涡旋、混合传统提取方法。标本放在装有 Lysing Matrix A 的 2.0 ml 试管中。同时几乎全部的标本很容易用预先填充化合物进行加工,另外,1/4 英尺的陶球用来加工坚硬的标本,比如:骨头、软骨和种子。在有 CLS 专样下,用 Lysing Matrix A 处理,在 FastPrep 仪器中将会匀浆化。对植物组织来说, CLS-VF 用来和 PPS 连用。酵母、海藻和真菌在CLS-Y 中被裂解。CLS-TC 是用来裂解其他所以标本。为了获得最大的柔韧性,试剂会提供所有的缓冲液。裂解之后,标本被离心到 pellet debris 和 lysing matrix。通过硅土基质 GENECLEAN 程序 DNA 被纯化。提取的 DNA 准备用来消化、电泳、PCR 和其他任何期望的用途。

适用研究范围:
动植物组织、细菌、酵母、藻类和真菌中分离基因组试剂盒

试剂盒组成:

品名 规格
Lysing Matrix A 100*2 ml tubes
1/4 Ceramic Spheres 100 spheres
Binding Matrix 66 ml
Concentrated SEWS-M 12 ml
DES 25 ml
CLS-VF 90ml
PPS 25ml
CLS-TC 110ml
CLS-Y 110ml
User manual 1 each
MSDS 1 each
Certificate of Analysis 1 each
实验者需自备的仪器及耗材
FastPrep® Instrument (fastprep 仪器)
Microcentrifuge that can freely spin 2.0 ml tubes (可装载 2.0ml 管子的离心管) Microcentrifuge tubes (2.0 ml and 1.5 ml) (可装载 1.5 和 2.0ml 管子的微型离心管) Rotator or low-speed vortex
(Optional) SPIN Filters and Catch Tubes, 100

操作步骤
1. 添加标本到 Lysing Matrix A 管中。
在水中或者是等渗盐溶液中,放置 100-200 mg 组织(新鲜、冰冻、干燥等)或者200μl细胞悬浮
液。对于细菌、酵母、海藻、或者是组织培养细胞是在悬浮液中生长,离心充足的培养体积,以便提供 50-100 mg 湿重的小球尺寸的标本。(在水或者等渗盐溶液中重新悬浮小球,获得 200 μl 的最大悬浮体积。)

2. 根据下表添加适当的 CLS。

Processing Tissue From: Add to Sample Tube:
Plant tissue 800μl CLS-VF and 200 μl PPS
Animal tissue, cultured cells, insects,
bacteria, bone, etc.
1.0 ml CLS-TC
Yeast,algae or fungi 1.0 ml CLS-Y

3. 在 FastPrep 仪器中用 6.0 设置的速度匀质化 40 秒钟。

4. 以 14,000 转离心 5-10 分钟到 pellet debris。

5. 转移 600 –700μl 的悬浮液到一支 2.0 ml 微型离心管,加同等体积的Binding Matrix, 颠倒混匀。
注释:在和下步之间,全部体积的完全混合,使用一支足够大的试管来提供空间是很重要的。不建议使用圆锥底的试管。在这步一支 2.0 ml 微型离心管就足够了。

6. 在室温的条件下,搅拌器一般搅拌 5 分钟进行孵育。
注释:一台低速的旋涡机在这步可以用,但是操作必须小心,以免除去 DNA。

7. 在 14,000 转离心 10 秒钟到pellet Binding Matrix,去除上清液(悬浮液)。

8. 添加 500μl 备好的 SEWS-M,用吸量管轻轻地吹动液体的力量使小球重新悬浮。
注释:确保酒精加到浓缩的,参看 3.1 部分。

9. 14,000 转离心 1 分钟,去除上清液。
注释:用旋转式移液器转移重新悬浮的Binding Matrix 到另一只旋转式移液器。用 14,000 转离心 1 分钟,去除枪头管里的物质。

10. 用 14,000 转离心 10 秒钟,用小的吸量管移动剩余液体。
注释:如果用一支,用 14,000 转离心第二次,用新的干净的试管替代 the Catch Tube。

11. 在 100μl 的 DES 中,通过轻轻地重新悬浮的Binding Matrix 洗提 DNA。

12. 用 14,000 转离心 1 分钟,转移洗提的 DNA 到干净的微型离心管中。DNA 可为下游应用作准备。为延长有效期将它存储在-20°C 或者是 4°C,直到使用。
注释:用一支吸量管小心转移DNA,以避免转移带有洗提 DNA 的 Binding Matrix 微粒,避免 shearing。注释:用 SPIN 移液器,在 14,000 转离心 1 分钟,将洗提的DNA 放入干净的catch tube。DNA 可为下游应用作准备。为延长有效期将它存储在-20°C 或者是 4°C,直到使用。